正確操作蛋白層析柱是達到理想效果的前提

 

蛋白層析柱可以依賴(lài)用泵將溶劑以固定流速打入填裝好的層析柱的自動(dòng)設備來(lái)完成或者依靠流動(dòng)相的重力作用自己完成。自動(dòng)系統或者重力柱系統均可與自動(dòng)組分收集器連接使用。

 

蛋白層析柱的一般操作步驟如下：

裝柱、上樣、平衡、洗脫、收集、柱再生。

（1）樣品的選擇與預處理。

（2）裝柱。將層析柱垂直固定，一般是先在柱內裝入約1/3高度的水或緩沖液排走空氣。要求柱子裝的均勻，不分層，無(wú)氣泡。

（3）平衡。用3-5倍柱床體積的起始緩沖液走柱，使介質(zhì)充分平衡，柱床穩定。

（4）上樣（加樣）。打開(kāi)層析柱下端出口，使緩沖液流出至剛好達到柱面。沿柱壁緩慢加入樣品，打開(kāi)下端出口，使樣品溶液流出至剛好達到柱面，再取少量起始緩沖液洗滌柱壁。加樣時(shí)應盡量減少柱面的攪動(dòng)。

（5）洗脫與收集。打開(kāi)起始緩沖液閥門(mén)，連續洗脫。用自動(dòng)部分收集器自動(dòng)或手動(dòng)收集，合并同一高峰各管。流速不宜過(guò)快且要穩定，洗脫液的成分也不應改變（凝膠溶脹程度），整個(gè)洗脫過(guò)程中始終保持一定的操作壓，可以用水或緩沖液作洗脫液。

（6）再生與保存。用原始平衡液進(jìn)行充分洗滌，即可重復使用。